Proteinsynthese und -reinigung
Molekularbiologische Standardmethoden werden im Routinebetrieb in der Core Facility angewendet. Das umfasst Transformation von Bakterien (z.B. E. coli) und rekombinante Proteinexpression.
Das erhaltene Protein wird im Anschluss über verschiedene Schritte weiterbearbeitet, um die angestrebte Qualität und Menge zu erhalten. Technisch schließt das folgende Prozesse ein:
- Proteinreinigung
- Bestimmung der Proteinidentität
- Bestimmung der Proteinreinheit
- Quantifizierung der Proteinmenge
Im Folgenden finden Sie Details zu den einzelnen Punkten.
Außerdem sind auch semisynthetische Methoden wie z.B. Natürliche Chemische Ligation von Proteinfragmenten Bestandteil des methodischen Repertoirs der Core Facility.
Äkta Prime plus (GE Healthcare)
LC-ESI micrOTOF-Q III (Bruker Daltonics GmbH)
Proteinreinheit wird mittels SDS-PAGE-Gelelektrophorese bestimmt.
Proteinkonzentrationen werden über Standard-Proteinbestimmungsmethoden und in Ausnahmefällen (Absprache erforderlich) mittels Aminosäureanalyse ermittelt.